玉米轉(zhuǎn)基因Bt11單重凝膠PCR是高品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，我公司的玉米轉(zhuǎn)基因Bt11單重凝膠PCR品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括玉米轉(zhuǎn)基因Bt11單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：玉米轉(zhuǎn)基因Bt11單重凝膠PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA279
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒



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本試劑盒適用于檢測(cè)植物中特異性基因Lectin，用于篩查待檢測(cè)植物中是否含有Lectin基因片段DNA成分。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

本試劑盒用一對(duì)大豆特異性基因Lectin特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用熒光PCR技術(shù)進(jìn)行大豆特異性基因Lectin的檢測(cè)。

試劑盒組成：

組份	數(shù)量	規(guī)格
Lectin反應(yīng)液(Lectin-qPCR MIX)	1管	672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對(duì)照(NTC)	1管	50μL/管
Lectin陽(yáng)性對(duì)照(Lectin-PTC)	1管	50μL/管

儲(chǔ)存條件：-20℃，應(yīng)避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。

使用方法：

一、樣品采集及處理：
?適用標(biāo)本類型：植物組織及其加工制品。
?樣本采集：稱取200g樣品。

二、DNA提?。?/strong>
樣品需用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀研磨至細(xì)粉末狀。
用戶可采用SN/T2584-2010中推薦的方法提取DNA，也可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的植物基因組DNA提取試劑盒(過(guò)柱法)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

三、檢測(cè)步驟：
1．PCR擴(kuò)增
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(Lectin-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個(gè)反應(yīng)加入的量	N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合物	1 μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(Lectin -PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
2．qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM，淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

四、結(jié)果分析：
1．結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
2．試驗(yàn)成立判定
?陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
?陽(yáng)性對(duì)照(Lectin -PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
?以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
3．結(jié)果判定
?在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性，表明Lectin核酸陽(yáng)性。
?Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明Lectin核酸陰性。
?如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
?對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行Lectin qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明Lectin核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

五、注意事項(xiàng)：
?初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
?所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
?PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
?樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
?試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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