BTN120914 小鼠淋巴細(xì)胞分離液

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產(chǎn)品名稱:小鼠淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào):BTN120914
產(chǎn)品規(guī)格:200mL
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名稱:淋巴細(xì)胞分離液1.077
貨號(hào):SY0532
規(guī)格:100ml|5×100ml
淋巴細(xì)胞分離液(Lymphocyte Separation Medium,簡稱LSM)是一種無菌的即用型分離液,基于B?yum的Ficoll-甲泛影鈉溶液做過一些改良,使得操作簡單快速且分離效率更高。每100 ml淋巴細(xì)胞分離液中含有6.2 g 聚蔗糖(Ficoll)和9.4 g 泛影酸鈉,20℃下的密度為1.0770-1.0800 g/ml。不僅適用于外周血淋巴細(xì)胞,也可分離其他組織來源的淋巴細(xì)胞,包括臍帶血和骨髓細(xì)胞。
工作原理
去纖維蛋白或肝素化人血以1:1的比例用生理鹽水或平衡鹽溶液稀釋,加在分離液上層,之后低速離心30 min。在離心過程中,差速遷移使其zuì終形成幾個(gè)細(xì)胞分層。聚集在管底的顆粒主要是紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞,通過梯度遷移至管底。根據(jù)其密度的大小,淋巴細(xì)胞和其他單個(gè)核細(xì)胞如單核細(xì)胞,以及血小板分布在血漿和LSM兩層之間。淋巴細(xì)胞可以通過吸取分界層溶液回收,并通過進(jìn)一步清洗來去除血小板,LSM和血漿。
操作方法
注:此操作流程適用于去纖維蛋白或抗凝血?jiǎng)┨幚磉^的人血。對(duì)于其他物種或者其他組織的血液,可能需要對(duì)此步驟做出一定的改進(jìn)。

1)輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合;
2)無菌條件轉(zhuǎn)移3 ml LSM到15 ml離心管中;
3)用2 ml 生理鹽水混合2 ml去纖維蛋白血液或肝素化血液;
4)小心將稀釋血液加入3 ml LSM(室溫即可)的上層,使得在血液和LSM間形成一個(gè)明顯的分層。不要將稀釋血液混入LSM中;
5)室溫下400g離心15-30min,離心可以沉淀紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞,同時(shí)可以在LSM上形成一層單核-淋巴細(xì)胞分層,如下圖所示(從上到下,依次分為血漿層-淋巴細(xì)胞層-LSM層-RBC顆粒);
6)吸出淋巴細(xì)胞層上方2-3 mm內(nèi)的血漿;
7)吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM層,并轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至離心管內(nèi)的淋巴細(xì)胞層中,室溫離心10 min,離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞的范圍,例如160 – 260 g(清洗去除LSM和降低血小板含量);
8)用平衡鹽緩沖液再清洗細(xì)胞一次,zuì后取適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
注意事項(xiàng)
1)稀釋去纖維蛋白血液或肝素化血液用的生理鹽水為無菌液體。
2)為保持淋巴細(xì)胞的活性,應(yīng)該采血后盡快進(jìn)行分離。分離細(xì)胞層實(shí)際上是單個(gè)核細(xì)胞層,包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
3)若溶液變渾濁,呈現(xiàn)出不同的黃色或可能有受污染跡象,不可再使用。
4)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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