革蘭陰性菌裂解緩沖液由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，革蘭陰性菌裂解緩沖液是我司眾多優(yōu)質(zhì)RNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括革蘭陰性菌裂解緩沖液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：革蘭陰性菌裂解緩沖液
產(chǎn)品貨號：GL1251
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

用途：
裂解細菌(革蘭陰性菌)中提取RNA

注意事項：
主要由Tris-HCl、EDTA、SDS、氯化鈉組成。

儲存條件：室溫，12個月

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名稱：植物RNA提取試劑盒2.0(無lǜ仿柱式提取)
貨號：BTN160907
規(guī)格：50次
本試劑盒是無酚無lǜ仿柱式植物RNA提取試劑盒(BTN160906)的升級產(chǎn)品。不僅不需要lǜ仿處理，還解決了提取的植物總RNA中出現(xiàn)基因組DNA污染這一難題，提取的RNA通過PCR驗證不含基因組DNA污染。

試劑盒特點：
1. 免酚和lǜ仿處理，操作安全可靠。
2. 簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。
3. RNA 純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
4. 目前已測試過上百種植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實驗。
6. 高于進口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反應(yīng)液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脫液	10ml

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，DNase低溫運輸保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNA保存液中的植物組織需用紙吸去RNA保存液體后再剪切成小塊)，放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細胞碎片)。有的植物組織(比如果實)含有大量水份，勻漿液會多于1mL，轉(zhuǎn)移時也只取1mL。
4.室溫12000～15000g離心3～5分鐘，管底沉淀為細胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物，屬于正?，F(xiàn)象)，千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 將一半的溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL。
10. 12000rpm室溫離心10秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會抑制后續(xù)反應(yīng)中DNase的活性。
11. 將10μl(10 U)的RNase-free DNase 加入到50μl 37℃預(yù)熱的DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成DNase工作液。
12. 將DNase工作液在37℃預(yù)熱1分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的DNA污染。如果DNA 沒有徹底降解(可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了DNase的活性)，此步的保溫時間可以適當(dāng)延長到10分鐘或15分鐘。
13. 直接在離心吸附柱中加0.7mL 通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。
14. 12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
15. 再加0.3mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
16. 12000rpm室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇(通用洗柱液中的成分)會影響RNA的使用。
17. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free 收集管中，加入30-50μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
18. 13000-15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
19. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
20. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
21. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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