Caspase 8活性檢測試劑盒是高品質(zhì)的細(xì)胞凋亡與增殖產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，我公司的Caspase 8活性檢測試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括Caspase 8活性檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Caspase 8活性檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：HR0430
產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T

Caspase 8活性檢測試劑盒(Caspase 8 Activity Assay Kit)是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中Caspase 8酶活性或純化的Caspase 8酶活性的試劑盒。
Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個(gè)caspase。在Fas-receptor和TNFR-1 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中caspase 8被激活，形成一個(gè)由p18和p10組成的二聚體，進(jìn)一步激活下游的caspase4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。
本Caspase 8活性檢測試劑盒是基于casepase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA，pNA在405nm 附近有強(qiáng)吸收，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 3的活性。
本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測，可用于培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織樣本的caspase-8檢測。

儲存條件：裂解緩沖液和檢測液室溫保存；其他-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事項(xiàng)：
● 須自備可以測定 A405或A400的酶標(biāo)儀或容量不超過100μl的分光光度檢測杯及相應(yīng)分光光度計(jì)。優(yōu)先考慮測定A405。
● 37℃下反應(yīng)如果顏色變化不明顯，可以適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間。
● 適合采用 Bradford法進(jìn)行蛋白濃度測定。
● 如果樣品中蛋白含量低，裂解樣品時(shí)需設(shè)法使樣品中的蛋白濃度接近 1-3mg/ml。
● 如果樣品中激活的caspase水平很低，適當(dāng)調(diào)節(jié)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的時(shí)間，找一個(gè)caspase激活比較強(qiáng)的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。
● Ac-IETD-pNA 避光保存，使用過程中盡量避光。
● Ac-IETD-pNA溶液凍存后可能產(chǎn)生沉淀，使用前請混勻。

使用方法：
一、裂解緩沖液和檢測緩沖液配制
根據(jù)待測樣品數(shù)準(zhǔn)備裂解緩沖液和檢測緩沖液，每1ml緩沖液中加入10μl DTT。
二、樣品處理
A、細(xì)胞樣品
1．收集 2-5×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
2．用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3．在細(xì)胞中加入100μl冷的裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15秒。
4．置冰上 15分鐘，每隔5分鐘高速渦旋振蕩15秒。
5．在 4℃，500×g條件下離心5分鐘。
6．快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> B．組織樣品
1．取適量組織樣本剪碎，按照 50mg/100μl冷的裂解緩沖液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體(或用液氮研磨)，冰上靜置15分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
2．在 4℃，500×g條件下離心5分鐘。
3．快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> 三、對上述處理過的上清用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。
四、Caspase 8活性檢測
1．取10μl 大約含20-50μg蛋白的裂解上清，加入90μl檢測緩沖液。
2．再加入10μl Ac-IETD-pNA(使用前請混勻)，在37℃下避光反應(yīng)1-2小時(shí)，有黃色顏色產(chǎn)生即可進(jìn)行檢測，如果顏色變化不明顯，時(shí)間可以延長，甚至孵育過夜。部分樣品中激活的caspase-8水平較低，顏色變化不明顯，直接上機(jī)檢測，與對照組樣品產(chǎn)品變化即可。
3．測定 A405nm或A400nm。
4．根據(jù)凋亡誘導(dǎo)的細(xì)胞的吸光值與空白對照細(xì)胞的吸光值的比值計(jì)算相對的Caspase 8活性程度。

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SNM517 DNA ladder 5000 60T
SNM524 線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1法) 50T|20T|10T
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SY1065 p53抑制劑(PFT-α) 100mg|1g
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貨號	名稱	規(guī)格
YT127	CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒(WST-8法)	100次|500次|2500次|10000次
YT890	DAPI溶液(5mg/ml)	5mg/ml×0.2ml
SNM507	CCK-8細(xì)胞活力檢測試劑盒(微板比色法)	1000T|500T|100T
SNM518	DNA ladder 3000	60T
KFS203	Caspase 8熒光法檢測試劑盒(AFC)	20T|50T|100T
KFS315	磺酰羅丹明B/SRB細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒	500T

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