北京百奧萊博供應的嘌呤霉素試劑(58-58-2)用于科研試驗，嘌呤霉素試劑(58-58-2)是我司眾多優(yōu)質(zhì)抗生素類之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括嘌呤霉素在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：嘌呤霉素
英文名稱：Puromycin
產(chǎn)品貨號：QN0078
產(chǎn)品規(guī)格：25mg|100mg

本品是蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞生長。

CAS：58-58-2
分子式：C22H29N7O5·2HCl
分子量：544.43
儲存條件：-20℃
純度：≥98%(TLC)
性狀：白色或白中帶有黃色的粉末
別名：二鹽酸嘌呤霉素;嘌呤霉素鹽酸鹽
溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉移酶(PAC)，賦予機體對嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉染細胞株。

嘌呤霉素在細胞穩(wěn)轉株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

使用方法：

1.建議使用濃度
哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，zuì佳濃度需要殺滅曲線來確定;
大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉株需要的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細胞本身的影響。

2.溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存;也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲存液。

3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定(以shRNA轉染或者慢病毒轉導為例)
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關。為了篩選到穩(wěn)定表達的shRNA細胞株，確定殺死未轉染/轉導細胞的zuì低濃度嘌呤霉素至關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線(kill curve)。
1)Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續(xù)的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜;
2)Day 2：
a)準備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0-15μg/mL，至少5個梯度);
b)往孵育過夜后的細胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基;之后37℃孵育細胞;
3)Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細胞存活率。
4)根據(jù)細胞的生長狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基;
5)每日監(jiān)測細胞，觀察存活細胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉染或者所有非轉導細胞的藥物zuì低濃度。

4. 哺乳動物穩(wěn)定轉染細胞株的篩選
等轉染含有pac基因的質(zhì)粒后，細胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉染子。
1)細胞轉染48h后，將細胞(原樣或稀釋)置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
注意：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用zuì明顯。細胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降。zuì好進行細胞分盤使其密度不超過25%。
2)每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3)篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿主細胞系和轉染篩選效率。注意：每日進行細胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4)轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細胞毒性實驗做準備。

注意事項：
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 嘌呤霉素為有毒化合物，操作時請小心拿放。

根據(jù)您的關注的嘌呤霉素試劑(58-58-2)，二鹽酸嘌呤霉素，嘌呤霉素鹽酸鹽，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：


RFT174 氨芐青霉素溶液(100mg/ml) 5×1ml
RFT177 G418溶液(50mg/ml) 20ml
RFT181 青鏈霉素溶液(100×) 100ml
QN0022 抗菌素A 10mg
QN0027 美洛昔康 5g
QN0036 苯唑西林 5g
QN0095 潮霉素B 1g
QN0099 環(huán)孢霉素A 250mg
QN0102 水溶性兩性霉素B 25mg|100mg

關注嘌呤霉素試劑(58-58-2)，二鹽酸嘌呤霉素，嘌呤霉素鹽酸鹽的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：

貨號	名稱	規(guī)格
RFT181	青鏈霉素溶液(100×)	100ml
QN0085	萘啶酮酸	10g
GL0006	丁胺卡那霉素溶液(50mg/ml)	10ml
GL2395	苯唑西林溶液(64mg/ml)	10ml
QN1506	G-418遺傳霉素硫酸鹽	100mg
QN1509	硫酸新霉素	10g|50g
Y13492	桿菌肽鋅	5g|25g|100g

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