在激發(fā)波長500nm，發(fā)射波長525 nm 附近，使用熒光顯微鏡/激光共聚焦檢測綠色熒光，從而測定組織內(nèi)活性氧水平。利用本試劑盒可以快速定性檢測樣本內(nèi)活性氧水平變化差異。...

產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用熒光顯微鏡直接觀察；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：

● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦顯微鏡

樣本類型：

● 新鮮冰凍切片 ● 振動(dòng)切片

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦 ● 離心機(jī) ● 移液器 ● PBS

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

● 對于某些樣本，如果熒光太強(qiáng)，可以按照1:200-1:1000稀釋探針。探針標(biāo)記的時(shí)間也可以根據(jù)情況在20-60分鐘內(nèi)適當(dāng)進(jìn)行調(diào)整。

● 以下操作步驟僅供參考，請根據(jù)實(shí)際樣本情況調(diào)整。

使用方法：

一、試劑配制

1、根據(jù)樣本數(shù)，用純水將DCFHDA活性氧熒光探針200-1000倍稀釋，配成染色工作液。

【注】：

● 不同樣本的活性氧差異較大，需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整稀釋倍數(shù)。一般染色終濃度按試劑盒中探針母液的200-1000倍稀釋，最大可至10000倍稀釋，1000倍稀釋適合大多數(shù)樣本。

2、用純水將10×清洗液10倍稀釋，配成1×清洗液工作液。

二、探針標(biāo)記

1、準(zhǔn)備待測的厚為10-20μm的未經(jīng)固定處理的冰凍切片。

【注】：

● 必須使用新鮮組織（手術(shù)切除后1小時(shí)內(nèi)）制成的冰凍切片/振動(dòng)切片。

● 否則不新鮮的樣本可能ROS已經(jīng)流失，檢測不到活性氧。

● 非新鮮樣本殘余的ROS也可以檢測到。

2、室溫下，小心加上200μL清洗液工作液，鋪滿整個(gè)切片表面，靜置5-10分鐘。

3、小心吸除清洗液。

4、滴加100μL染色工作液，在37℃培養(yǎng)箱避光孵育20-60分鐘。

【注】：

● 最好在濕盒中孵育，避免液體蒸發(fā)。

5、移除染色液。

6、用PBS洗滌切片2-3次。

7、加蓋玻片或甘油封片。

8、熒光顯微鏡檢測。

【注】：

● 染色完成后，立即進(jìn)行熒光定性分析。

● 激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長525nm。

● 熒光強(qiáng)，表明活性氧（ROS）含量高。

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