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講解薄層色譜掃描儀的正確使用方法
發(fā)布時間:2018-09-03瀏覽次數(shù):2791返回列表
薄層色譜掃描儀用于薄層色譜板或電泳板的光密度掃描。薄層定量工作zui初是通過目視法或測面積法,對薄層上分離的斑點與標準品行含量估計,但由于方法粗糙,可引起很大誤差。后來將斑點定量收集后,結(jié)合比色法或紫外分光光度法等行定量,雖然準確度有所提,但操作復雜,工作效率低。因此多年來薄層色譜法只能停留在分離鑒定和半定量的水平。70 年代后各學者結(jié)合薄層色譜法的點相繼設計出各種型號的薄層色譜儀,使薄層定量工作入了儀器化、自動化的階段,從而使薄層色譜法成為微量、快速定量分析的有力手段。以下內(nèi)容講解薄層色譜掃描儀的正確使用方法。
、薄層板制備除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器行涂布 (厚度為0.2~0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度 (可通過透射光和反射光檢視)。
二、點樣除另有規(guī)定外,用點樣器點樣于薄層板上,般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
三、展開展開缸如需預用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與缸樣、寬的濾紙條,端浸入展開劑中,密封缸的蓋,使系統(tǒng) 平衡或按正文規(guī)定操作。將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封缸 蓋,待展開至規(guī)定距離(般為10~15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項下的規(guī)定檢測。
四、如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。