【古朵生物】免疫組化如何選擇使用封閉血清？

  做免疫組化時，一般都會封閉。以減少假陽性。

  封閉主要是用于封去切片上一些非特異性吸附。用一種非特異性的蛋白，把那些容易吸附蛋白的空間和位點占起來，這樣，加上抗體時，抗體只能與對應(yīng)的抗原去結(jié)合了。

  一般封閉可以用5%的BSA，這個價格便宜，而且效果還行。但理論上，用與二抗同來源的正常血清會好。

  比如，一抗為國產(chǎn)的兔抗IL-2，二抗用標(biāo)記的羊抗兔IgG。那么，封閉血清就選擇與二抗同來源的正常羊血清（一般為山羊）。而同理，如果一抗為羊抗IL-2，二抗可以選標(biāo)記的兔抗羊IgG，封閉血清選擇正常兔血清。

  使用時，可以用PBS將正常血清稀釋20倍，直接滴加在切片上，37℃度10-30分鐘，直接甩掉，不洗，輕輕的吸一下旁邊的液體，再加一抗。聽說4℃過夜比起37℃兩小時背景會干凈一些。當(dāng)然，時間也會長一些。

  古朵生物闡述：免疫組化中的血清封閉原理

  先加一抗后再封閉的話，一抗就會結(jié)合到固相表面上，這種結(jié)合力是非特異性的疏水作用力，這種作用力是比較強的，經(jīng)過處理的固相表面如硝酸纖維膜，酶標(biāo)板對蛋白的吸附力強，你再去封閉就沒有作用了。

  當(dāng)然，也不是說封閉蛋白就完全不會封閉掉一抗的蛋白結(jié)合位點，在蛋白過量的條件下，蛋白質(zhì)之間會有黏附和堆積作用，但這種作用通常是不穩(wěn)定的。

  如果你所選擇的一抗與固相抗原親和力較高，在適合的buffer條件下，一抗會競爭它的結(jié)合位點。蛋白質(zhì)之間那點黏附和堆積作用力當(dāng)然競爭不過它啦。

  "組織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的陽性染色稱為非特異性背景染色，常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。有效方法是在用抗體前加制備第二抗體動物之非免疫血清(1:5~1:20)封閉組織上帶電荷基團而除去與抗體非特異性結(jié)合。必要時可加入2%~5%牛血清蛋白，可進(jìn)一步減少非特異性染色。作用時間為10~20min。也可用除制備抗體以外的其它動物血清(非免疫的)。有明顯溶血的血清不能"

  "對消除背景的非特異性染色有很好的效果。當(dāng)然使用特異性高、效價高的

  抗體是重要的條件。"

  "抗原-抗體是免疫球蛋白分子上的抗原結(jié)合簇與抗原分子上的抗原決定簇相互吸引以及多種分子間的引力參與發(fā)生的。這種反應(yīng)沒有化學(xué)鍵的形成?？乖?抗體的結(jié)合是可逆的“

  抗原-抗體上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨；牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針