ELISA試劑盒檢測(cè)樣品中sIL-2R含量全過(guò)程

  ELISA試劑盒檢測(cè)樣品中sIL-2R含量需預(yù)備的資料和試劑

  (1)純化或重組的IL-2R蛋白(α鏈，P55，CD25，Tac抗原)(40.000u/ml)

  (2)FITC符號(hào)的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml)：FITC為異硫氰酸熒光素，這兒僅作為半抗原運(yùn)用，而不作為熒光素符號(hào)。

  (3)堿性磷酸酶符號(hào)的兔抗FITC抗體(酶標(biāo)抗體)

  (4)對(duì)硝基苯磷酶鹽底物液;用pH9.8的二乙醇胺緩沖液溶解，配成濃度為1mg/ml。

  (5)1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS)：為封閉液點(diǎn)稀釋液

  (6)不同倍比稀釋度的sIL-2R規(guī)范品：以1% BSA-PBS稀釋。

  (7)洗刷液(0.05%Tween20-PBS)

  (8)待測(cè)sIL-2R樣品

  (9)96孔酶標(biāo)板(聚苯乙烯板)，酶標(biāo)儀，波長(zhǎng)465nm濾光片

  (10)刻度吸管，毛細(xì)吸管，加樣器(頭)，4℃冰箱

  ELISA試劑盒檢測(cè)樣品中sIL-2R含量具體操作步驟

  (1)以必定濃度的純化或重組的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶標(biāo)板，100ul/孔，4℃過(guò)夜(16-72h);

  (2)棄包被液，用1%BSA-PBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，200ul/孔，置室溫2h;

  (3)用洗刷液加滿各孔置3min，然后傾去，反復(fù)洗刷3次;

  (4)別離參加不同稀釋度的sIL-2R規(guī)范品及待測(cè)樣品，50μl/孔;

  (5)各孔均參加FITC符號(hào)的IL-2R McAb，50μl/孔，充沛混勻后置室溫2h;

  (6)同上洗刷3次;

  (7)各孔均參加堿性磷酶酶符號(hào)的兔抗FITC抗體，100μl/孔，置室溫1h;

  (8)同上洗刷3次;

  (9)各孔均參加底物液，100μl/孔，置室溫15-30min;

  (10)用酶標(biāo)儀以波長(zhǎng)405nm測(cè)各孔OD值。

  ELISA試劑盒檢測(cè)樣品中sIL-2R含量結(jié)果剖析辦法

  (1)以sIL-2R規(guī)范品各稀釋度對(duì)應(yīng)的濃度值為橫座標(biāo)(X)，相應(yīng)的OD值為縱座標(biāo)(Y)，在一般座標(biāo)紙上制作競(jìng)賽按捺規(guī)范曲線，OD值隨規(guī)范品sIL-2R濃度升高而下降。

  (2)依據(jù)待測(cè)樣品所測(cè)得的OD值，在規(guī)范曲線上查得樣品sIL-2R含量。

  (3)ELISA試劑盒檢測(cè)樣品中sIL-2R含量運(yùn)用本辦法時(shí)，不需要核算按捺百分率。

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