電泳緩沖液的特點(diǎn)是什么?有什么作用?

  電泳緩沖液是核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳系統(tǒng)的一個(gè)重要組成， 是電泳場(chǎng)中的導(dǎo)體，也是維持電泳系統(tǒng)恒定 pH值的必要條件。常見的核酸電泳緩沖液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。

  電泳緩沖液的特點(diǎn)：

  1.TAE是使用緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量(TBE中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量)，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得好的分離效果，此外，回收DNA片段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。TAE的缺點(diǎn)是緩沖容量小，長(zhǎng)時(shí)間電泳(如過夜)不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。

  2.TBE的特點(diǎn)是緩沖能力強(qiáng)，長(zhǎng)時(shí)間電泳時(shí)可選用TBE，并且當(dāng)用于電泳小于1kb的片段時(shí)分離。TBE用于瓊脂糖凝膠時(shí)易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價(jià)結(jié)合的四羥基硼/酸鹽復(fù)合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。

  3.TPE的緩沖能力也較強(qiáng)，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。

  電泳緩沖液的作用：

  1.緩沖液在電泳過程中的一個(gè)作用是維持合適的pH。電泳時(shí)陽(yáng)極與陰極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng)，陽(yáng)極發(fā)生的是氧化反應(yīng)(4OH--4e->2H2O+O2)，陰極發(fā)生的是還原反應(yīng)(4H++4e->2H2)，長(zhǎng)時(shí)間的電泳將使陽(yáng)極變酸，陰極變堿。一個(gè)好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強(qiáng)的緩沖能力，使溶液兩極的pH保持基本不變。

  2.電泳緩沖液的另一個(gè)作用是使溶液具有一定的導(dǎo)電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應(yīng)含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時(shí)電泳速度變慢;太高時(shí)就會(huì)造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。

  3.電泳緩沖液還有一個(gè)組分是EDTA，加入濃度為1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等離子，防止電泳時(shí)激活 DNA酶，此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

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