植物elisa試劑盒檢測(cè)樣本的處理方法

  植物elisa試劑盒檢測(cè)應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物淀粉分支酶SBE水平。用純化的植物淀粉分支酶SBE抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物淀粉分支酶SBE，再與HRP 標(biāo)記的植物淀粉分支酶SBE抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物淀粉分支酶SBE呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物淀粉分支酶SBE濃度。

  植物elisa試劑盒檢測(cè)的操作步驟：

  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃;

  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  3、樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加;

  4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min;

  5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次;

  6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min;

  7、每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

  植物elisa試劑盒檢測(cè)的樣本處理：

  1、血清：使用不含熱原和內(nèi)dusu的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

  2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

  3、細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

  5、保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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