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PCR反應(yīng)污染情況分析

發(fā)布時(shí)間:2024-07-08瀏覽次數(shù):739返回列表

對(duì)PCR的環(huán)境污染,有如下幾種治理方法:


1. 用常規(guī)消毒液定期在環(huán)境中噴霧消毒處理。


2. 稀酸處理法:對(duì)可疑器具用1mol/L鹽酸擦拭或浸泡,使殘余DNA脫嘌呤;其缺點(diǎn)是鹽酸對(duì)皮膚有一定的腐蝕性。


3. 紫外照射法:紫外波長(zhǎng)一般選擇254/300nm,照射30分鐘至2小時(shí)。但需要注意的是,UV照射僅對(duì)500bp以上長(zhǎng)片段有效,對(duì)短片段效果不大。


4. 選用商品化的DNA污染祛除劑。我們推薦的是Minerva公司的PCR CleanTM 噴霧劑、濕巾。其1分鐘即起效,方便快捷,效果顯著,可同時(shí)去除DNA和RNA。作用1分鐘后,用紙巾擦拭,即可完成對(duì)DNA污染的清除。


對(duì)于PCR反應(yīng)液的污染,可采取以下方法:


1. DNase I 法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室溫反應(yīng)30min后加熱滅活,然后加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行正常PCR擴(kuò)增。


2. 內(nèi)切酶法:選擇識(shí)別4個(gè)堿基的內(nèi)切酶(如MspI和TaqI等),可同時(shí)選擇幾種,以克服用一種酶只能識(shí)別特定序列的缺陷,室溫作用1h后加熱滅活進(jìn)行PCR。


3. 紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進(jìn)行紫外照射,注意事項(xiàng)與方法同上述UV照射法。


4. 尿嘧啶糖苷酶(UNG)法:用dUTP代替dTTP,使PCR產(chǎn)物中摻入大量dU。在再次進(jìn)行PCR擴(kuò)增前,用UNG處理PCR混合液即可消除PCR產(chǎn)物的殘留污染。由于UNG在PCR循環(huán)中的變性一步便可被滅活,因此不會(huì)影響含dU的新的PCR產(chǎn)物。


總之,靈敏度越高的PCR反應(yīng)越容易出現(xiàn)PCR污染。采用適當(dāng)?shù)拇胧┫廴?,可以避免重?fù)實(shí)驗(yàn)和浪費(fèi)試劑,也使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果加可靠而。


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