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P1158/pInt噬菌體基因質(zhì)粒說明書

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  • 更新日期:2020-07-16 15:10
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詳細(xì)介紹
別名:     NM_020347.4;BBS17
復(fù)制子:     pUC
原核抗性:     Amp
克隆菌株:     DH5a
培養(yǎng)條件:     37度
質(zhì)粒宿主:     大腸桿菌
質(zhì)粒用途:     基因模板
片段類型:     cDNA
片段物種:     人
原核抗性:     Amp




一、載體分類及載體組成元件
載體分類
1、按屬性分類:病毒載體和非病毒載體
病毒載體是一種常見的分子生物學(xué)工具,可將遺傳物質(zhì)帶入細(xì)胞,原理是利用病毒具有傳送其基因組進(jìn)入目的細(xì)胞,進(jìn)行感染的分子機(jī)制。可發(fā)生于完整活體或是細(xì)胞培養(yǎng)中??蓱?yīng)用于基礎(chǔ)研究、基因療法或疫苗。用于基因治療和疫苗的病毒載體應(yīng)具備以下基本條件:
(1)攜帶外源基因并能包裝成病毒顆粒;
(2)介導(dǎo)外源基因的轉(zhuǎn)移和表達(dá);
(3)對(duì)人體不致??;
(4)在環(huán)境中不會(huì)引起增殖和傳播。
   非病毒載體一般是指質(zhì)粒DNA。


2、按進(jìn)入受體細(xì)胞的類型分類:原核載體、真核載體、穿梭載體(含原核和真核2個(gè)復(fù)制子,能在原核和真核細(xì)胞中復(fù)制,并可以在真核細(xì)胞中有效表達(dá))。
3、按功能分類:克隆載體、表達(dá)載體
克隆載體:具有克隆載體的基本元件(Ori,Ampr,MCS等),可以攜帶DNA--pian段或外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞并克隆和大量擴(kuò)增DNA-pian段(外源基因)的載體。
   表達(dá)載體:克隆載體中加入一些與表達(dá)調(diào)控(具有轉(zhuǎn)錄/翻譯所必需的DNA順序)有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。


載體組成元件
1、復(fù)制起始位點(diǎn)Ori:即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。Ori的箭頭指復(fù)制方向,其他元件標(biāo)注的箭頭多指轉(zhuǎn)錄方向(正向)。
2、抗生素抗性基因:可以便于加以檢測(cè),如Amp+ ,Kan+
(1)Ampr:水解β-內(nèi)酰胺環(huán),解除氨芐的毒性。
(2)tetr :可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。
(3)camr:生成氯霉素羥乙酰基衍生物,使之失去毒性。
(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶,使G418(卡那霉素衍生物)失活。
(5)hygr:使潮霉素β失活。
 
 
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