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 96T大鼠beta-纖維蛋白原（β-FIB）酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 beta-纖維蛋白原（β-FIB）含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠 beta-纖維蛋白原（β-FIB）水平。用純化

的大鼠 beta-纖維蛋白原（β-FIB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中

依次加入 beta-纖維蛋白原（β-FIB），再與 HRP 標(biāo)記的 beta-纖維蛋白原（β-FIB）抗體結(jié)

合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶

的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 beta-纖

維蛋白原（β-FIB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)

曲線計(jì)算樣品中大鼠 beta-纖維蛋白原（β-FIB）的濃度。

試劑盒組成

1  30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7  終止液

6ml×1 瓶

2  酶標(biāo)試劑

6ml×1 瓶

8  標(biāo)準(zhǔn)品（40pg/ml） 0.5ml×1 瓶

3  酶標(biāo)包被板

4  樣品稀釋液

5  顯色劑 A 液

6  顯色劑 B 液

標(biāo)本要求

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10  說明書

11  封板膜

12  密封袋

1.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個(gè)

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

20pg/ml 

10pg/ml 

5pg/ml 

2.5pg/ml 

1.25pg/ml 

5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。